【关键词】小叶黑柴胡；药材鉴定；化学成分；药理毒理；研究进展
【中图分类号】R282.7【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2016）08-0026-03
柴胡是伞形科柴胡属植物，始载于《神农本草经》，位列上品。具有疏散退热，舒肝解郁，升举阳气的作用。用于感冒发热，寒热往来，胸肋胀痛，月经不调，子宫脱垂，脱肛，为常用中药材。中医临床常用药柴胡除药典正品外，品种来源繁多，质量良莠不齐。现野生资源枯竭、价格昂贵，市场流通以家种品为主。而传统中药以野生为主，现市场流通的家种品木质化严重，质量堪忧。主流观点认为野生品品质优于家种品，现商品柴胡非经典记载柴胡。为探讨药用柴胡来源之一的小叶黑柴胡的药用价值，笔者收集自1993年以来公开发表的小叶黑柴胡相关文献22篇，就其药材鉴定、化学成分和药理毒理进行综述，现报道如下。
1药用柴胡的种类
2010版中国药典仅收载了柴胡（BupleurumchinenseDC.）和狭叶柴胡（BupleurumscorzonerifoliumWilld.）2种的干燥根为药用柴胡的原植物，按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”，并明确指出大叶柴胡（BupleurumlongiradiatumTurcz.）有毒，不可当柴胡药用[1]。《甘肃省中药材标准（2009年版）》[2]、《宁夏中药材标准（1993年版）》[3]均收载“黑柴胡”药材，前者品种为黑柴胡（BupleurumsmithiiWoiff.）、小叶黑柴胡（BupleurumsmithiiWoiff.var.parvifoliumShanet.Y.Li）或黄花鸭跖柴胡（BupleurumcommelynoideumBoiss.var.flaviflorumShanet.Y.Li）的干燥根或根茎，后者品种为小叶黑柴胡（BupleurumsmithiiWoiff.var.parvifoliumShanet.Y.Li）的干燥根或根茎。两省标准均收载小叶黑柴胡。
2小叶黑柴胡的流通和分布
小叶黑柴胡在甘肃、宁夏等省区属有临床习用历史的品种和主流种类，药用历史悠久。两省药品监管部门认为和正品有相似功效，分别收入本省中药材标准，允许在市场流通，代正品柴胡药用。要求中药饮片生产、经营企业以“黑柴胡”命名，但不得以药典正品“柴胡”命名，以示区别。据文献报道，小叶黑柴胡在浙江平阳按伪品对待[4]，宁波按混淆品对待[5]。
小叶黑柴胡为伞形科柴胡属植物。分布于我国甘肃、宁夏、青海、内蒙古等地，生长于海拔2700～3700m的地区，常生长在山坡草地或林下，目前尚未由人工引种栽培。潘胜利等[6]在对小叶黑柴胡的产地调查中发现其分布于甘肃、宁夏、青海、内蒙古等省区及河北、山西、陕西的北部等地。生于1400～3000m的山坡草地、山谷、山顶阴处。小叶黑柴胡在甘肃主要分布于张掖、武威、兰州、定西、甘南及陇南等地[2]。
3小叶黑柴胡的药材性状
宁夏标准[3]记载：本品性状呈圆柱形或圆锥形，常弯曲，稀有分枝，主根长4～7cm，直径0.2～0.5cm。表面黑褐色或棕褐色，粗糙，有多数突起的须根痕，根头膨大，多分枝，常残留茎基及棕褐色膜质叶基。质较松脆，易折断，断面略平坦，皮部浅棕色，具多数裂隙，木部黄白色，有放射状列隙。气微香，味微苦辛，具败油气。
潘胜利等[6]认为小叶黑柴胡根头部常有数个茎基成指状丛生，茎基部具多数片状残留叶柄，有时还带有少量残留的叶。根圆柱形至长圆锥形，长6～12cm，直径0.4～0.8cm，侧根2～3个；表面黑褐色至灰褐色，偶可见较疏的横纹，具皮孔，有时可见支根痕形成的瘤状突起。质松脆，易折断，断面较平坦，皮部黄棕色，常有较多空隙；木部浅黄色，辐射状排列明显。气微香。胡双丰[5]认为小叶黑柴胡根呈圆柱形，较小，长5～7cm，直径0.3～0.5cm，根头分歧，顶端残留多数茎基和绿色叶基，下侧具两行呈疣状突起的不定芽，根下部多分枝，有的中间骤然膨大形成枣核样突起。表面黑褐色，有浅色支根痕及横向皮孔。质较松脆，易折断，断面显纤维性，栓皮层易剥落。油腥气较浓。甘肃标准与宁夏标准不同的地方是甘肃标准直径略大，约0.2～0.7cm，笔者分析与甘肃标准中有其他两个品种有关。潘胜利等认为长度和直径较大，笔者分析与产地不同有关，其他特征基本相同。
4小叶黑柴胡的化学成分
4.1柴胡皂甙王英华等[7]从小叶黑柴胡根中分得5个三萜皂甙和2个三萜皂甙元。根据理化性质和波谱分析，分别鉴定为柴胡皂甙a、柴胡皂甙d、柴胡皂甙b2、柴胡皂甙b4、chikusaikosideI、柴胡皂甙元F、柴胡皂甙元G，均为首次从该植物中分离得到。曹纬国等[8]测定青海产小叶黑柴胡中总皂苷含量大于2.77%，柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量分别高于0.54%和0.14%，其中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量远高于中国药典中柴胡含量项下的标准。提示青海产小叶黑柴胡具有较高的药用价值。宁夏标准[3]报告，宁夏产小叶黑柴胡含总皂甙1.415%，略低于北柴胡，高于同属其他柴胡。其中柴胡皂甙a为0.18%，柴胡皂甙d为0.20%。潘胜利等[6]曾对云南省的8种药用柴胡及北柴胡和红柴胡，通过组织化学鉴定法，发现柴胡皂甙在柴胡根中主要存在于韧皮部和射线部位，而木质部中存在极少。
4.2挥发油杨永健等[9]从小叶黑柴胡挥发油中分离鉴定出27个化合物，主要成分有5-甲基麝香草醚（18.22%）、对-聚伞花素（9.75%）、环己烷（7.79%）、2-戊基呋喃（2.71%）、二甲基乙缩醛己醛（2.69%）等。宁夏标准[3]报告甘肃临夏产者含挥发油0.05%。脂肪族化合物特别是其中的烷烃类化合物，可作为柴胡属植物挥发油的特征性成分而与其它挥发油相区别[6]。4.3黄酮周伟等[10]对小叶黑柴胡地上茎叶部分化学成分进行研究，分离鉴定了5黄酮类成分：水仙苷、芦丁、异鼠李素、广寄生苷、槲皮素，均系首次从该植物中分离获得。潘胜利[6]报道柴胡的地上部分存在较多的黄酮类成分。
4.4甾醇徐秀珍等[11]采用薄层扫描法测定小叶黑柴胡与北柴胡中甾醇类成分的含量，结果小叶黑柴胡与北柴胡的含量分别为0.5125mg/g和0.2408mg/g，小叶黑柴胡的甾醇含量高于北柴胡一倍，提示小叶黑柴胡的抗炎作用优于北柴胡。
4.5多糖潘胜利等[6]进行柴胡糖类的定量分析，糖和多糖含量最高的为赞皇的北柴胡（15.97%）和汶川柴胡（15.95%），小叶黑柴胡为（13.75%）。
4.6苯提取物潘胜利等[6]进行苯提取物的定量分析，含量最高的为小叶黑柴胡（兰州）5.06%。
5小叶黑柴胡的药理毒理研究
5.1药理研究赵玉珍等[12-13]通过动物（小鼠、家兔）实验表明，小叶黑柴胡水煎剂和粗皂甙有显著的解热作用，相同剂量的小叶黑柴胡的水煎剂和粗皂甙之间无显著差异。小叶黑柴胡乙醚取物和粗皂甙有显著的抗炎作用，作用优于北柴胡。其粗皂甙有北柴胡粗皂甙类似的镇痛作用。小叶黑柴胡粗皂甙还能显著降低四氯化碳（CCl4）肝损伤小鼠的血清转氨酶，有显著的保肝作用，它降转氨酶的作用比北柴胡粗皂甙和联苯双酯都强。小叶黑柴胡乙醚提取物使小鼠胸腺明显增重，使小鼠血清IgG明显升高，有增强免疫功能的作用，而北柴胡对免疫功能无显著作用。根据这些结果，认为小叶黑柴胡不仅可以代替北柴胡供药用，而且在保肝、调节机体免疫功能方面也有进一步研究和开发利用价值。
潘胜利等[6]通过CCl4损伤小鼠肝法进行了6种柴胡保肝作用比较实验，发现保肝作用锥叶柴胡和小叶黑柴胡最强。胡淑婷等[14]选择小叶黑柴胡的乙醚提取物，作用于体外培养的人胃腺癌MGC-803细胞，观察小叶黑柴胡诱导人胃腺癌MGC-803细胞的凋亡效应。结果小叶黑柴胡可诱导人胃腺癌MGC-803细胞凋亡。王铮等[15]通过观察小叶黑柴胡总多糖对小鼠多项免疫指标的影响，探讨其免疫调节作用。结果小叶黑柴胡总多糖对小鼠免疫功能有调节作用。吴梓春[16]以小叶黑柴胡茎叶中提取的黄酮类物质为材料，对其抗氧化性能进行了体外实验。结果小叶黑柴胡茎叶总黄酮（TFA）提取物对自由基都有较好的清除能力，并呈现很好的量效关系。TFA提取物具有很好的抗氧化作用。詹雪晶等[17-18]采用化学物质α-萘异硫氰酸酯（α-naphthylisothiocyanate，ANIT）诱发大鼠肝内胆汁淤积模型，用TFA给大鼠灌胃给药，观察血清、肝组织指标变化。结果显示，TFA能明显提高大鼠损伤肝细胞的细胞膜Na+，K+-ATP酶活性，促进胆汁酸的分泌，胆汁排泄增加，降低大鼠血清中的中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、谷酰胺转肽酶（GGT）的水平。采用CCl4致小鼠急性肝损伤，与模型组相比较，经TFA预防性治疗后，治疗组小鼠血清中ALT、AST的水平明显降低，同时肝组织中丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的含量明显下降、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）的活力明显增强。TFA保肝降酶作用明显，对CCl4所致急性肝损伤小鼠有很好的保护作用。刘秀芳等[19-20]采用小鼠尾静脉注射刀豆蛋白诱发小鼠免疫肝损伤模型，观察血清ALT和AST，并测定小鼠肝组织中MDA的含量。在光学显微镜下观察肝脏病理组织的变化。与正常组相比，TFA能降低小鼠免疫肝损伤模型的ALT和AST活力和肝组织中MDA的含量，能明显改善肝组织的病理学改变，能提高小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能，使小鼠的免疫功能提高，对免疫性肝损伤小鼠有一定的保护作用。采用分光光度法，测定TFA对多种自由基的清除效果，验证其抗氧化活性，结果TFA对DPPH?自由基活性、?OH自由基和O2-?自由基的清除率可达94.67%、93.60%和90.04%，TFA具有很好的抗氧化活性。
罗磊等[21]通过代谢物组学方法对小叶黑柴胡总黄酮防治ANIT所致大鼠急性黄疸型肝损伤过程中的尿液代谢组进行研究，结果显示，给药组和模型组相比，大鼠尿液代谢物中马尿酸、庚酰肉毒碱、5β-胆甾烷-3α，7α，12α，23R，25-醇、4-羟双氢鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇、溶血磷脂酰乙醇胺（0∶0/24∶0）、苯乙尿酸等含量降低，6-酮前列腺素F1α和3-磺基去氧胆酸含量升高，提示小叶黑柴胡总黄酮明显缓解ANIT引起的大鼠急性黄疸型肝损伤，可用于防治急性黄疸型肝损伤。
5.2毒理研究赵玉珍等[12]通过动物实验表明，小叶黑柴胡水煎剂、乙醚提取物、粗皂苷给小鼠灌胃，半数致死量（LD50）分别为大于200g/kg、（10.25±1.33）g/kg和（6.00±1.11）g/kg。小叶黑柴胡毒性较小，其水煎剂和粗皂甙小鼠灌胃毒性按原生药计算小于北柴胡，唯其乙醚提取物小鼠灌胃毒性按原生药计算大于北柴胡。小叶黑柴胡乙醚提取物（主要为甾醇、木质素等）含量高于北柴胡，可能是其有毒性的原因之一。王有志等[22]曾报道小叶黑柴胡的乙醚提取物有一定的毒性。
6小结及展望
柴胡属植物大多数品种在我国不同地区实际在供药用或有药用历史，并不局限于药典标准。有关小叶黑柴胡地方标准收载情况，笔者只查到了甘肃、宁夏收载的原始文献，据其他文献报道山西（1987年）、青海（1992年）标准亦有收载，但因年代久远，未找到原始文献。建议省级药监部门及时更新地方药材标准。地方标准中药材跨辖区销售的合法性问题方面，国家药品标准分为药典标准、部颁标准和省、自治区、直辖市标准（地方标准），笔者理解只要列入国家药品标准即为合法，但部分省区药监部门将小叶黑柴胡列为非法，造成中药材资源浪费。建议国家药监部门出台地方标准药材流通相关法规。关于小叶黑柴胡的鉴定，文献描述不一致方面，建议鉴定样本应注明产地。因同一品种，生长环境不同，性状理化、特征则不同。药监部门制定标准时应广泛采集标本，求同存异，统一标准。
?小叶黑柴胡根含皂苷及皂苷元、挥发油、甾醇、糖和多糖等，其中皂苷、甾醇含量高于药典北柴胡。地上茎叶部分含水仙苷、芦丁、异鼠李素、广寄生苷、槲皮素等黄酮类成分。
小叶黑柴胡根部分具有解热、抗炎、镇痛、保肝、增强免疫和诱导胃癌细胞凋亡作用，抗炎、保肝作用优于北柴胡，免疫增强作用显著。茎叶黄酮类物质对动物胆汁淤积性、化学性、免疫性肝损伤均有良好保护作用。其机制与黄酮类物质发挥清除自由基、提高Na+、K+-ATP酶和SOD活性、促进胆汁酸分泌、增加胆汁排泄作用，进而降低血清肝酶、胆红素和肝组织MDA水平相关。
综上，小叶黑柴胡在临床中应用具有明显疗效，且毒副作用小，属于优质野生资源，药用价值大，值得进一步研究，开发利用。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部?2010年版）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：263-264.
[2]甘肃省食品药品监督管理局.甘肃省中药材标准（2009年版）[S].兰州：甘肃文化出版社，2009：129-134.
[3]宁夏回族自治区卫生厅.宁夏中药材标准[S].银川：宁夏人民出版社，1993：171-178.
[4]杨莹莉.柴胡真伪鉴别[J].时珍国医国药，2003，14（4）：222.
[5]胡双丰.柴胡与其混淆品小叶黑柴胡及锥叶柴胡的鉴别[J].药学实践志，2006，24（4）：222-226.
[6]徐国钧，徐珞珊，王峥涛，等.常用中药材品种整理和质量研究（南方协作组?第三册）[M].福州：福建科学技术出版社，1999：1-44.
[7]王英华，邢世瑞.小叶黑柴胡中皂甙成分的研究[J].中国中药杂志，1998，23（2）：96-98.
[8]曹纬国，陶燕铎，张有金，等.青海产小叶黑柴胡中皂苷类成分的含量分析[J].中国现代应用药学，2012，29（4）：323-326.
[9]杨永健，袁昌齐.柴胡属植物挥发油成分分析[J].中草药，1993，6：289-291.
[10]周伟，蔡光明，何桂霞，等.小叶黑柴胡茎叶中的黄酮类成分[J].中国天然药物，2006，4（5）：387-389.
[11]徐秀珍，王英华，伊桂兰.小叶黑柴胡中甾醇类成分的定量分析[J].宁夏医学院学报，2000，22（6）：404-405.
[12]赵玉珍，陶上乘，邢永春，等.小叶黑柴胡的药理作用研究[J].中药材，1995，18（8）：405-408.
[13]赵玉珍，陶上乘，王英华，等.小叶黑柴胡的药理作用的进一步研究[J].1998，21（6）：307-309
[14]胡淑婷，奥海航，王英华，等.小叶黑柴胡诱导人胃腺癌MGC-803细胞凋亡的实验研究[J].宁夏医学院学报，2007，29（1）：13-15.
[15]王铮，程小芹，徐晗，等.小叶黑柴胡总多糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国临床药学杂志，2009，18（4）：200-204.
[16]吴梓春.小叶黑柴胡茎叶提取物中总黄酮抗氧化作用[J].科教纵横，2011，11：192-194.
[17]詹雪晶，蔡霈，刘秀芳，等.小叶黑柴胡茎叶总黄酮对ANIT所致肝内胆汁淤积大鼠的影响[J].中国药理学通报，2010，26（6）：780-783.
[18]詹雪晶，蔡霈，蔡光明，等.小叶黑柴胡茎叶总黄酮对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中南药学，2010，8（4）：241-243.
[19]刘秀芳，詹雪晶，蔡光明，等.小叶黑柴胡茎叶总黄酮对小鼠免疫性肝损伤的影响[J].中南药学，2011，9（2）：89-92.
[20]刘秀芳，李婷婷，蔡光明，等.小叶黑柴胡茎叶总黄酮体外抗氧化活性的研究[J].中南药学，2011，9（3）：172-175.
关键词：柴胡疏肝散中医内科临床应用
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.01.524
【中图分类号】R2【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2014）01-0354-02
柴胡疏肝散用于疏肝和胃、理气止痛，症状为腹痛、腹胀、伴有失眠、健忘恶心呕吐、苔薄白等等。通过疏肝解郁，可以有效缓解上述症状。随着医学界对中医药及其疗法的研究力度不断加大，发现柴胡疏肝散不仅具有疏肝解郁的功效，而且对内科疾病治疗中也具有很好的疗效。
1柴胡疏肝散的概况
明朝著名医生张景岳所著的《景岳全书》曾有记载：柴胡疏肝散以柴胡、芍药为主，以香附、枳壳、陈皮、川芎、甘草为辅料配置而成。其中，柴胡、芍药主要起镇静、镇痛的作用，同时香附也能起到镇痛的作用，并且有助于驱除消化积气的作用，陈皮有松弛平滑肌的作用，还能抗炎、抗溃疡。如果在治疗过程中使用柴胡疏肝散，可以和肝解郁，它还能起到治疗胁痛、寒热往来之功效。
柴胡疏肝散疏肝解郁之功效，现代临床实验上也具有很好的功效。柴胡疏肝散在治疗肝炎、胆囊炎、慢性胃炎等病症上，它有效的缓解了肝脾不和、肝胆气郁的病症，并对该类疾病的治疗也取得了良好的治疗效果。通过使用柴胡疏肝散，调理人体气血，可以有效治理一些内科疾病。
2柴胡疏肝散在内伤咳嗽中的应用
内伤咳嗽与寻常感冒咳嗽不同，内伤咳嗽多由内科疾病引起的，致病时间较长，祛病是一个相对缓慢的过程。内伤咳嗽一般有两种发病类型：①由其他脏器的疾病发生病变、感染至肺部；②另一类是器官自身的病变扩散导致的。内伤性咳嗽患者常常具有心理压力大、心情积郁愤怒等症状，这种症状导致肝器官失调、气机不畅，进而导致体内肺部形成积血，进而引发为咳嗽。如果内伤咳嗽患病时间较长了，常常表现为口干咳嗽，口苦咽干，并伴随胸闷胀痛的症状。内伤咳嗽患者服用柴胡疏肝散可以理顺肺气，降低逆火，而且香附有助于疏通患者体内的积气。对于因内伤咳嗽患者，如果患者痰液粘稠，可以加入一些贝母进行清肺祛痰，而对于伤津者，可以在药方中加入天花粉、沙参等清热型药材，从而达到养阴生津的效果。而且中药厚朴、半夏以宽胸畅通宣泄郁气；香附、陈皮理气和胃止痛，且有助于消除上腹痛不适等症。诸药合用辛以散结，苦以降通，气滞郁结方可解除。
3柴胡疏肝散在胃十二指肠溃疡中的应用
胃十二指肠溃疡是极为常见的疾病。它的局部表现是位于胃十二指肠壁的局限性圆形或椭圆形的缺损。患者常常伴有周期性上腹部疼痛、返酸、嗳气等症状。这类疾病多是由情绪不稳、饮食无规律导致患者体内脾胃失调，气血不畅而引发该类疾病。患十二指肠溃疡病的患者需要调理其气血，疏肝解郁，才能达到治疗效果。而且胃十二指肠溃疡患者的病根在于胃，但该病的发生常常与肝、胆、脾等脏腑功能失调密切关系，人体内其他器官的功能失调，导致体内生理功能紊乱，从而引发胃十二指肠溃疡。
中医治疗胃十二指肠溃疡的过程中，使用柴胡疏肝散作为治疗的主要药物。柴胡疏肝散在治疗胃十二指肠溃疡时，可以舒畅患者气机，调和气血。柴胡疏肝散的功能体现在疏肝行气、活血止疼，而且白芍、甘草配伍缓急止痛，疏理肝气以和脾胃，且具有保护胃粘膜屏障和修复粘膜之作用，这符合胃十二指肠溃疡的病症需要。通过临床诊断，并根据患者体质、病状的不同，适当的加入一定量的柴胡疏肝散，调理人体气血，最终治愈胃十二指肠溃疡。
4柴胡疏肝散在心因性疾病中的应用
心因性疾病一般是由生活压力、环境变换等原因所造成的，其病症常常表现为紧张、恐惧、多疑。心因性疾病如果长期得不到释怀，就会损害患者的身体健康。心因性疾病患者一般都存在头晕头痛、心慌气短、失眠等病症。而且由于患者身患多疾，气血不畅，长期心情低落。如果患者不能及时疏解肝气，心情不畅，可能会导致患者换上抑郁症。
中医临床医学上对于心因性疾病的治疗，一般会使用柴胡疏肝散。心因性疾病患者服用柴胡疏肝散后，可以缓解头晕头痛、心慌气短、失眠等病症。对具有头晕头痛病症的患者，可以在方中加入一定量的党参、白术等药材进行治疗。这类病症的用药方法一般是水熬，将药材加水后煎熬成液体服用，一般十天一疗程，两到四个疗程后就会收到治疗效果。
5结语
柴胡疏肝散证是肝气郁结，不得疏泄，气郁导致血滞，故见胁肋疼痛诸症。在柴胡疏肝散中加入陈皮、枳壳、川芎、香附，可以增强疏肝行气，达到活血止痛之效。因此患者在服柴胡疏肝散后肝气条达，血脉通畅，疼痛止住后病症也就消除了。在中医内科疾病治疗中，使用柴胡疏肝散需要根据患者病因、病症及身体体质的差异，适当地增减一些其他药物，才能达到良好的医疗效果。
参考文献
【关键词】柴胡;煎剂;柴胡皂苷;高效液相色谱;指纹图谱
abstract：objectivetodisclosethechangesofsaikosaponinsbetweenradixbupleurianditswaterextractbyhplcfingerprinttechnology.methodsthehplcfingerprintwasperformedonahypersilc18column(250mm×4.6mm,5μm)withgradientelutionofacetonitrile-water[0-70min：acetonitrile-water(22∶78)(50∶50)],theflowratewas1.0ml·min-1,thecolumntemperaturewassetat30℃,andthedetectionwavelengthwas210and252nm.resultsninepeakswhichdidnotexistinradixbupleuriwerefoundinitswaterextract.conclusionfurtherresearchshouldbecarriedontheninenewcomponentsappearedinthewaterextractofradixbupleuritoexplainthefunctionsofsaiko.
keywords：radixbupleuri;waterextraction;saikosaponin;hplc;fingerprint
已有报道指出，柴胡在煎煮过程中皂苷类成分存在结构的转变[1]，但是人们在柴胡的提取工艺研究当中，往往采取各种措施来避免这种转变的发生，如碱性溶剂提取[2]、低温浓缩[3]、渗漉等[3]，上述措施虽然提高了柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的转移率，却导致了人们对柴胡煎剂中的皂苷成分，即转化的成分，缺乏深入系统的认识。煎剂作为传统中药临床用药的主要形式，是中医药理论建立的基础，对于煎剂中成分认识的程度决定了人们对中医中药认知的程度。基于此，我们采用hplc指纹图谱技术首次对柴胡煎剂中皂苷类成分的全貌进行了研究，并与药材中的成分进行比较，为进一步揭示中药柴胡的功效奠定基础。
1仪器与试药
waters600高效液相色谱仪，紫外检测器，empower色谱工作站，kq-50db超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)，mettler-ae240型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。柴胡药材(洛阳嵩县、山西太原、辽宁沈阳、河北承德)购于洛阳关林药材市场，经河南科技大学化工与制药学院王忠东教授鉴定为伞形科植物北柴胡bupleurumchinensedc.的干燥根。乙腈(迪马公司，色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，ab-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备
2.1.1柴胡煎剂中皂苷类成分[4]取适当粉碎的柴胡药材20g，10倍量水煎煮2次，1h/次，趁热过滤，合并滤液，水浴浓缩，最后定容至50ml量瓶中。取2.5ml上述浓缩液(折合生药材1.0g)，上样于装有10ml大孔吸附树脂的层析柱，进行动态吸附，待吸附完毕后，先用体积分数为5%的naoh水溶液50ml洗脱，弃去;然后用水洗脱至流出液为中性;再用体积分数为30%的乙醇溶液50ml洗脱，弃去;最后用体积分数为95%的乙醇溶液160ml洗脱，收集体积分数为95%的乙醇溶液洗脱部分，于水浴上浓缩至干，用体积分数为50%的乙醇定量转入10ml量瓶中，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.1.2药材中皂苷类成分[5]取柴胡药材粗粉1.0g，精密称定，置于具塞三角瓶中，加入体积分数为5%的氨性甲醇溶液50ml，浸润30min，超声1h，用甲醇补足至原重，静置，吸取上清液25ml，置于蒸发皿中，于水浴上浓缩至干，用甲醇定量转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.2色谱条件[6]大连伊利特hypersilc18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱[0～70min,乙腈-水(22:78)(50:50)];流速1.0ml·min-1;柱温30℃;检测波长210，252nm;进样量20μl。按照此色谱条件得各供试品溶液色谱图。见图1。
2.3稳定性实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12h进样，记录指纹图谱。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰的保留时间和峰面积无明显变化，rsd分别为0.58%～1.13%，0.32%～1.21%(210nm)和0.65%～1.50%，0.23%～1.45%(252nm)。说明供试品溶液在12h之内稳定。
2.4精密度实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，重复进样6次，记录指纹图谱。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰保留时间和峰面积无明显变化，rsd分别为0.33%～1.39%，0.56%～1.55%(210nm)和0.70%～1.93%，0.51%～1.43%(252nm)。说明仪器精密度良好。
2.5重复性实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，精密称定，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液6份，记录色谱图。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰保留时间和峰面积的rsd为0.62%～1.01%，1.13%～2.38%(210nm)和0.63%～1.36%，0.86%～1.83%(252nm)。说明重复性良好。
a柴胡煎剂(210nm);b柴胡药材(210nm);
c柴胡煎剂(252nm);d柴胡药材(252nm)
图1柴胡煎剂及药材的指纹图谱
2.6样品测定取不同产地的柴胡药材(洛阳嵩县、山西太原、辽宁沈阳、河北承德)，分别混合均匀，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，并记录指纹图谱。对不同产地的柴胡药材比较其煎煮前、后的皂苷类成分的指纹图谱，发现煎煮后出现了大量药材中不含有的色谱峰。结果见表1。表1柴胡煎煮后指纹图谱中色谱峰的变化“*”表示该峰煎煮后消失;“**”表示该峰为煎煮后新生成的色谱峰3讨论
结合文献[5]及表1可知，柴胡煎煮后柴胡皂苷a(44.08min)的含量大为减低，柴胡皂苷d(59.04min)完全消失。同时，在252nm波长下出现9个新的色谱峰(13.98，18.19，26.08，30.92，37.55，44.21，46.21，49.98，57.71min)。
煎煮后新出现的9个色谱峰其紫外图谱相同，见图2。提示新生成的柴胡皂苷的结构母核中均含有11,13(18)共轭环外双键结构。
图2新生成色谱峰的紫外图谱
在测定时通过多波长下的hplc指纹图谱比较，发现252nm波长下的图谱可较好地反映柴胡煎煮后新生成的成分，因此检测波长除了选择柴胡皂苷常用的210nm，同时还选择了252nm。
对于柴胡的药理研究，绝大多数的文献均是关于柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d[7，8]，而关于其它类型柴胡皂苷的药理研究较少。本实验的结果表明，柴胡汤剂中含有大量的其它类型的柴胡皂苷，对于该类成分的研究有利于更好地揭示中药柴胡的功效。
【参考文献】
[1]刘密新，吴祝平，杨成对，等.中药复方中柴胡皂苷a和d的lc/ms/ms研究[j].质谱学报，2000，21(3)：77.
[2]邬科芳，倪力军，张立国.不同提取工艺对柴胡中柴胡皂苷a含量的影响[j].中成药，2006，28(8)：1230.
[3]黄成钢，马春晖，朱海燕，等.一种皂苷类成分的医学用途[p].中国专利：cn101062046a，2007-10-31.
[4]王胜春，李晓玮，王俊琴.反相高效液相色谱法测定柴胡及柴葛颗粒中柴胡皂苷d的含量[j].时珍国医国药，2004，15(5)：262.
[5]林东昊，茅仁刚，王智华，等.23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a，c，d含量的rp-hplc测定[j].药物分析杂志，2004，24(5)：479.
[6]李军，姜华，石任兵，等.四逆散不同配伍对柴胡皂苷b1、h提取量的影响[j].中国中药杂志，2008，33(15)：55.