柴胡是中医常用药物，有解表退热、疏肝解郁、升举阳气等功效。在汤剂中配伍不同中药可发挥不同功效：配伍葛根、羌活则发汗解表；配伍黄芩、青蒿则透表泄热；配常山、草果则截疟退热；配香附、郁金则疏肝解郁；配伍黄芪、升麻则升举阳气。药理作用亦证实北柴胡注射液对流行性感冒病毒有较强的抑制作用，对结核杆菌亦有效。其解热抗炎、镇痛镇静功效亦在动物实验中得到证实，中成药小柴胡冲剂已在临床普遍使用。
柴胡另有降血压、降低血管通透性、抗溃疡、收缩平滑肌、镇咳、抗肾炎及兴奋垂体分泌促肾上腺皮质激素、刺激肾上腺引起皮质酮的合成和分泌的作用。但其较确切、较明显的是保肝、利胆、降脂等功效。两组小鼠均喂食霉米而产生肝功能障碍，一组同时喂食北柴胡，其谷丙转氨酶及谷草转氨酶之升高远较不给北柴胡之对照组为轻。对伤寒疫苗引起的兔肝功能障碍，口服北柴胡煎剂有较显著的改善作用。粗柴胡皂苷能使被四氯化碳损伤的大鼠肝功能恢复正常，能使半乳糖聚集所致的肝功能与组织损伤得以恢复。对酒精引起的肝功能损害亦有效，但不如甘草。柴胡若与甘草配伍，对急性实验性肝损伤有明显的保肝作用，且为急性病毒性肝炎的临床观察所证实，降低血清谷丙转氨酶快，使病程缩短。
辅助治疗肝癌也有明显的疗效。本人经治的31例肝癌病人，除手术、介入治疗外，坚持服用中药汤剂是存活较长不可缺少的因素之一。存活期大于二年23例，占74.19%，最长的一例存活10年，后因心肌梗死抢救无效而亡。所用的基本方为柴莪汤，其中柴胡、杞子、甘草为保肝药。如上所述，柴胡有保肝作用外，还具有提高细胞免疫功能及巨噬细胞吞噬能力；明显增加蛋白质合成；能抑制小鼠艾氏腹水癌、延长生存期；并可增加抗癌效应的肿瘤坏死因子，使肝癌细胞坏死、裂解。杞子同样有保肝效应，并调节免疫功能抑制癌细胞。莪术、丹参、鳖甲活血软坚，因肝内血液高粘状态特别突出，且更易通过癌栓广泛转移，降低血液高粘状态，有利于降低转移机会。
中医有“见肝之病，当先实脾”之说。肝癌脾虚证候不在少数，故再配以党参、白术、茯苓等健脾补气。如此配伍对迅速恢复手术创伤、减轻介入治疗的反应，特别着眼整体，调动体内抗癌抑癌能力是有益的。体现西医攻为先，中医补为主的取长补短、有机结合的优势。
【关键词】柴胡;煎剂;柴胡皂苷;高效液相色谱;指纹图谱
abstract：objectivetodisclosethechangesofsaikosaponinsbetweenradixbupleurianditswaterextractbyhplcfingerprinttechnology.methodsthehplcfingerprintwasperformedonahypersilc18column(250mm×4.6mm,5μm)withgradientelutionofacetonitrile-water[0-70min：acetonitrile-water(22∶78)(50∶50)],theflowratewas1.0ml·min-1,thecolumntemperaturewassetat30℃,andthedetectionwavelengthwas210and252nm.resultsninepeakswhichdidnotexistinradixbupleuriwerefoundinitswaterextract.conclusionfurtherresearchshouldbecarriedontheninenewcomponentsappearedinthewaterextractofradixbupleuritoexplainthefunctionsofsaiko.
keywords：radixbupleuri;waterextraction;saikosaponin;hplc;fingerprint
已有报道指出，柴胡在煎煮过程中皂苷类成分存在结构的转变[1]，但是人们在柴胡的提取工艺研究当中，往往采取各种措施来避免这种转变的发生，如碱性溶剂提取[2]、低温浓缩[3]、渗漉等[3]，上述措施虽然提高了柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的转移率，却导致了人们对柴胡煎剂中的皂苷成分，即转化的成分，缺乏深入系统的认识。煎剂作为传统中药临床用药的主要形式，是中医药理论建立的基础，对于煎剂中成分认识的程度决定了人们对中医中药认知的程度。基于此，我们采用hplc指纹图谱技术首次对柴胡煎剂中皂苷类成分的全貌进行了研究，并与药材中的成分进行比较，为进一步揭示中药柴胡的功效奠定基础。
1仪器与试药
waters600高效液相色谱仪，紫外检测器，empower色谱工作站，kq-50db超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)，mettler-ae240型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。柴胡药材(洛阳嵩县、山西太原、辽宁沈阳、河北承德)购于洛阳关林药材市场，经河南科技大学化工与制药学院王忠东教授鉴定为伞形科植物北柴胡bupleurumchinensedc.的干燥根。乙腈(迪马公司，色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，ab-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备
2.1.1柴胡煎剂中皂苷类成分[4]取适当粉碎的柴胡药材20g，10倍量水煎煮2次，1h/次，趁热过滤，合并滤液，水浴浓缩，最后定容至50ml量瓶中。取2.5ml上述浓缩液(折合生药材1.0g)，上样于装有10ml大孔吸附树脂的层析柱，进行动态吸附，待吸附完毕后，先用体积分数为5%的naoh水溶液50ml洗脱，弃去;然后用水洗脱至流出液为中性;再用体积分数为30%的乙醇溶液50ml洗脱，弃去;最后用体积分数为95%的乙醇溶液160ml洗脱，收集体积分数为95%的乙醇溶液洗脱部分，于水浴上浓缩至干，用体积分数为50%的乙醇定量转入10ml量瓶中，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.1.2药材中皂苷类成分[5]取柴胡药材粗粉1.0g，精密称定，置于具塞三角瓶中，加入体积分数为5%的氨性甲醇溶液50ml，浸润30min，超声1h，用甲醇补足至原重，静置，吸取上清液25ml，置于蒸发皿中，于水浴上浓缩至干，用甲醇定量转移至5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.2色谱条件[6]大连伊利特hypersilc18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱[0～70min,乙腈-水(22:78)(50:50)];流速1.0ml·min-1;柱温30℃;检测波长210，252nm;进样量20μl。按照此色谱条件得各供试品溶液色谱图。见图1。
2.3稳定性实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12h进样，记录指纹图谱。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰的保留时间和峰面积无明显变化，rsd分别为0.58%～1.13%，0.32%～1.21%(210nm)和0.65%～1.50%，0.23%～1.45%(252nm)。说明供试品溶液在12h之内稳定。
2.4精密度实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，重复进样6次，记录指纹图谱。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰保留时间和峰面积无明显变化，rsd分别为0.33%～1.39%，0.56%～1.55%(210nm)和0.70%～1.93%，0.51%～1.43%(252nm)。说明仪器精密度良好。
2.5重复性实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，精密称定，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液6份，记录色谱图。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰保留时间和峰面积的rsd为0.62%～1.01%，1.13%～2.38%(210nm)和0.63%～1.36%，0.86%～1.83%(252nm)。说明重复性良好。
a柴胡煎剂(210nm);b柴胡药材(210nm);
c柴胡煎剂(252nm);d柴胡药材(252nm)
图1柴胡煎剂及药材的指纹图谱
2.6样品测定取不同产地的柴胡药材(洛阳嵩县、山西太原、辽宁沈阳、河北承德)，分别混合均匀，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，并记录指纹图谱。对不同产地的柴胡药材比较其煎煮前、后的皂苷类成分的指纹图谱，发现煎煮后出现了大量药材中不含有的色谱峰。结果见表1。表1柴胡煎煮后指纹图谱中色谱峰的变化“*”表示该峰煎煮后消失;“**”表示该峰为煎煮后新生成的色谱峰3讨论
结合文献[5]及表1可知，柴胡煎煮后柴胡皂苷a(44.08min)的含量大为减低，柴胡皂苷d(59.04min)完全消失。同时，在252nm波长下出现9个新的色谱峰(13.98，18.19，26.08，30.92，37.55，44.21，46.21，49.98，57.71min)。
煎煮后新出现的9个色谱峰其紫外图谱相同，见图2。提示新生成的柴胡皂苷的结构母核中均含有11,13(18)共轭环外双键结构。
图2新生成色谱峰的紫外图谱
在测定时通过多波长下的hplc指纹图谱比较，发现252nm波长下的图谱可较好地反映柴胡煎煮后新生成的成分，因此检测波长除了选择柴胡皂苷常用的210nm，同时还选择了252nm。
对于柴胡的药理研究，绝大多数的文献均是关于柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d[7，8]，而关于其它类型柴胡皂苷的药理研究较少。本实验的结果表明，柴胡汤剂中含有大量的其它类型的柴胡皂苷，对于该类成分的研究有利于更好地揭示中药柴胡的功效。
【参考文献】
[1]刘密新，吴祝平，杨成对，等.中药复方中柴胡皂苷a和d的lc/ms/ms研究[j].质谱学报，2000，21(3)：77.
[2]邬科芳，倪力军，张立国.不同提取工艺对柴胡中柴胡皂苷a含量的影响[j].中成药，2006，28(8)：1230.
[3]黄成钢，马春晖，朱海燕，等.一种皂苷类成分的医学用途[p].中国专利：cn101062046a，2007-10-31.
[4]王胜春，李晓玮，王俊琴.反相高效液相色谱法测定柴胡及柴葛颗粒中柴胡皂苷d的含量[j].时珍国医国药，2004，15(5)：262.
[5]林东昊，茅仁刚，王智华，等.23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a，c，d含量的rp-hplc测定[j].药物分析杂志，2004，24(5)：479.
[6]李军，姜华，石任兵，等.四逆散不同配伍对柴胡皂苷b1、h提取量的影响[j].中国中药杂志，2008，33(15)：55.